Plasmide CRISPR d'Activation (m) Integrin α3/ITGA3/CD49c: sc-421161-ACT

Itga3 code l’intégrine α3 (ITGA3/CD49c), une sous-unité α qui s’hétérodimérise avec β1 pour former un récepteur de la laminine, essentiel à l’adhésion cellule–matrice extracellulaire. Ce récepteur coordonne l’assemblage des adhésions focales et une signalisation bidirectionnelle via des voies incluant FAK/Src, PI3K–AKT et MAPK, influençant l’organisation du cytosquelette, la survie et la migration directionnelle. Dans les tissus murins, ITGA3 soutient les interactions épithéliales et endothéliales avec les membranes basales et contribue à la morphogenèse, à la réparation des plaies et à l’homéostasie tissulaire. Une signalisation de l’intégrine α3 dérégulée et des programmes d’adhésion cellulaire modifiés sont fréquemment étudiés dans des contextes de comportement invasif, de remodelage associé à la fibrose et de microenvironnements inflammatoires.

Integrin α3/ITGA3/CD49c Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Itga3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Integrin α3/ITGA3/CD49c Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Itga3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Itga3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Integrin α3/ITGA3/CD49c. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Itga3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Integrin α3/ITGA3/CD49c au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Integrin α3/ITGA3/CD49c dans les cellules tumorales présentant une expression de Itga3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.