Plasmide CRISPR d'Activation (h) Integrin α3/ITGA3/CD49c: sc-400841-ACT

ITGA3 code l’intégrine α3 (CD49c), une sous-unité α qui forme l’hétérodimère α3β1 afin de médier l’adhésion cellule–matrice extracellulaire, en particulier aux laminines des membranes basales. En se couplant aux complexes d’adhésion focale, ITGA3 régule le remodelage du cytosquelette, la polarité cellulaire et la migration directionnelle, en intégrant des signaux issus des voies FAK/Src, PI3K–AKT et MAPK qui façonnent les programmes de survie et de motilité. L’intégrine α3β1 contribue aussi à l’organisation épithéliale et à l’intégrité de la barrière en coordonnant une signalisation dépendante de l’adhésion et le dialogue avec les récepteurs de facteurs de croissance. Une expression dérégulée d’ITGA3 et une signalisation des intégrines altérée ont été associées à une invasion anormale et à un comportement métastatique dans de multiples contextes cancéreux, ainsi qu’à des défauts de réparation épithéliale en contexte inflammatoire et fibrotique.

Integrin α3/ITGA3/CD49c Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ITGA3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Integrin α3/ITGA3/CD49c Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ITGA3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ITGA3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Integrin α3/ITGA3/CD49c. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ITGA3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Integrin α3/ITGA3/CD49c au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Integrin α3/ITGA3/CD49c dans les cellules tumorales présentant une expression de ITGA3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.