Plasmide CRISPR d'Activation (h) Integrin α11/ITGA11: sc-402541-ACT

ITGA11 code l’intégrine α11, une sous-unité α qui s’associe à β1 pour former un récepteur liant le collagène, fortement impliqué dans l’adhésion cellule–matrice extracellulaire et la mécanotransduction. L’intégrine α11/β1 favorise le remodelage du collagène, la migration des fibroblastes et l’organisation du microenvironnement stromal, en reliant l’engagement de la matrice à la dynamique du cytosquelette et à des voies de signalisation telles que les adhésions focales/FAK, les kinases de la famille SRC, ainsi que les cascades MAPK et PI3K-AKT en aval. Par ces mécanismes, ITGA11 contribue au remodelage tissulaire et aux réponses fibrosantes, et sa dérégulation est étudiée dans des contextes incluant une signalisation stromale altérée et un comportement cellulaire invasif. La modulation de l’expression d’ITGA11 est donc utile pour explorer les microenvironnements riches en collagène, la signalisation dépendante de l’adhésion et la plasticité phénotypique induite par la matrice.

Integrin α11/ITGA11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ITGA11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Integrin α11/ITGA11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ITGA11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ITGA11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Integrin α11/ITGA11. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ITGA11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Integrin α11/ITGA11 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Integrin α11/ITGA11 dans les cellules tumorales présentant une expression de ITGA11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.