Plasmide CRISPR/Cas9 KO Integrin α1/ITGA1/CD49a (h): sc-401275

Présentation

ITGA1 code l’intégrine α1 (CD49a), qui s’hétérodimérise avec l’intégrine β1 pour former un récepteur se liant au collagène et à la laminine, médiant l’adhésion cellule–matrice extracellulaire et la mécanotransduction. Via l’assemblage des adhérences focales et la signalisation par les voies FAK/Src, PI3K–AKT et MAPK, l’intégrine α1 influence, de manière dépendante du contexte, l’organisation du cytosquelette, la migration, la prolifération et la survie. L’activité d’ITGA1 contribue à la régulation du remodelage tissulaire et du positionnement des cellules inflammatoires en modulant la dynamique d’adhésion et les réponses transcriptionnelles en aval. Des altérations de la signalisation intégrine α1/β1 ont été associées à une dérégulation des interactions cellule–matrice observée dans la fibrose, le dialogue tumeur–stroma et le remodelage du microenvironnement immunitaire, ce qui en fait une cible utile pour des études centrées sur les voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Integrin α1/ITGA1/CD49a (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ITGA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ITGA1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ITGA1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Integrin α1/ITGA1/CD49a.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ITGA1 pour l'étude de la signalisation de Integrin α1/ITGA1/CD49a, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ITGA1 essentiels à la fonction de Integrin α1/ITGA1/CD49a
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ITGA1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Integrin α1/ITGA1/CD49a plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Integrin α1/ITGA1/CD49a plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ITGA1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Integrin α1/ITGA1/CD49a plasmide HDR (h) et le Integrin α1/ITGA1/CD49a (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ITGA1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ITGA1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.