Plasmide CRISPR d'Activation (h) Integrin α1/ITGA1/CD49a: sc-401275-ACT

ITGA1 code l’intégrine α1 (CD49a), une sous-unité α qui s’associe à l’intégrine β1 pour former le récepteur du collagène/de la laminine α1β1 et assurer l’adhérence des cellules à la matrice extracellulaire (MEC). Ce récepteur régule la signalisation des adhésions focales, le remodelage du cytosquelette et des voies en aval telles que FAK/Src, MAPK/ERK et PI3K-AKT, qui influencent la migration, la survie et la différenciation. L’activité d’ITGA1 contribue à la détection de la MEC, à la mécanotransduction et au remodelage tissulaire dans des contextes stromaux et immunitaires, notamment dans des microenvironnements riches en collagène. Une signalisation dérégulée de l’intégrine α1 a été associée au remodelage fibrotique, au trafic des cellules inflammatoires et à l’invasion des cellules tumorales dans plusieurs modèles pertinents pour les maladies, où la composition de la MEC et la signalisation d’adhérence sont altérées.

Integrin α1/ITGA1/CD49a Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ITGA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Integrin α1/ITGA1/CD49a Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ITGA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ITGA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Integrin α1/ITGA1/CD49a. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ITGA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Integrin α1/ITGA1/CD49a au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Integrin α1/ITGA1/CD49a dans les cellules tumorales présentant une expression de ITGA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.