Plásmido Doble Nickase (h2) Int-6: sc-405759-NIC-2
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h2)Int-6 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Int-6 (h2) y el plásmido de doble nickasa Int-6 (h22) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a EIF3E. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Int-6 Anticuerpo (A-11): sc-133251
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h2) Int-6 | sc-405759-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano EIF3E (Int-6) codifica una subunidad central del complejo del factor de iniciación de la traducción eucariota 3 (eIF3), que ayuda a coordinar el reclutamiento de la subunidad ribosomal 40S y regula el inicio de la traducción, con efectos posteriores sobre la proteostasis y la progresión del ciclo celular; Int-6 se ha relacionado con la comunicación cruzada entre el control translacional y las vías de recambio proteico, incluidas interacciones con el sistema ubiquitina–proteasoma, y se estudia en contextos como la remodelación de la traducción de ARNm en respuesta al estrés; la expresión o función alterada de EIF3E se asocia con una señalización de crecimiento desregulada y se ha reportado en múltiples conjuntos de datos relacionados con el cáncer, lo que respalda su utilidad para investigar programas de traducción oncogénicos y la estabilidad del genoma; la edición génica de EIF3E permite estudios mecanísticos sobre la integridad del complejo eIF3, la traducción selectiva de ARNm y las dependencias de vías en modelos celulares humanos mediante enfoques de knockout, knock-in o perturbaciones específicas de dominio.
Int-6 El plásmido de doble nicasa (h2) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EIF3E en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EIF3E. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EIF3E. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EIF3E alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.