Plasmide Double Nickase (m) Insulin II: sc-421140-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Insulin II correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Insulin II Double Nickase (m) et le plasmide Insulin II Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Ins2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Insulin II | sc-421140-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Ins2** code l’**insuline II**, une hormone des cellules β pancréatiques essentielle à l’homéostasie du glucose et au métabolisme anabolique. Après une sécrétion stimulée par le glucose, l’insuline active la signalisation du récepteur de l’insuline afin de réguler les voies **PI3K–AKT** et **MAPK**, favorisant la captation du glucose, la synthèse de glycogène, la lipogenèse et l’inhibition de la néoglucogenèse hépatique. **Ins2** influence également la fonction et la survie des cellules β via les réponses au stress du réticulum endoplasmique et la maturation de la proinsuline au sein de la voie de sécrétion. Le dérèglement de la production d’insuline ou de sa signalisation est étroitement associé à des phénotypes de maladies métaboliques, faisant d’**Ins2** une cible majeure pour les études mécanistiques de la régulation du glucose et de la biologie des cellules β.
Insulin II Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ins2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ins2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ins2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ins2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.