Plasmide Double Nickase (h) INSR/Insulin Receptor: sc-400075-NIC

INSR code le récepteur humain de l'insuline, une tyrosine kinase membranaire qui initie une signalisation dépendante de l'insuline afin de réguler la captation du glucose, le métabolisme du glycogène et des lipides, ainsi que la croissance cellulaire. Après liaison du ligand et autophosphorylation, INSR recrute des protéines adaptatrices telles qu'IRS1/2 pour activer les voies PI3K–AKT–mTOR et RAS–RAF–MEK–ERK, coordonnant des programmes métaboliques et mitogènes. La fonction d'INSR influence le trafic vésiculaire de GLUT4 et, plus largement, le contrôle de la détection des nutriments et de la signalisation anabolique. Une signalisation INSR dérégulée est impliquée dans la résistance à l'insuline et les maladies métaboliques, et elle est également exploitée par de nombreux types de tumeurs pour soutenir des phénotypes de prolifération et de survie.

INSR/Insulin Receptor Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus INSR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de INSR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de INSR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de INSR.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.