Plasmide CRISPR d'Activation (h) INSR/Insulin Receptor: sc-400075-ACT

INSR code pour le récepteur de l’insuline, une tyrosine kinase transmembranaire qui se lie à l’insuline afin de déclencher l’autophosphorylation et la signalisation en aval via les voies PI3K–AKT et RAS–MAPK. Ces cascades coordonnent la captation du glucose, la synthèse du glycogène, le métabolisme lipidique, ainsi qu’un contrôle plus global de la croissance et de la survie cellulaires, avec des interactions croisées avec mTOR et des programmes transcriptionnels régulés par FOXO. L’activité d’INSR module la dynamique d’endocytose et de recyclage du récepteur et influence la sensibilité à l’insuline au niveau de protéines adaptatrices telles que les membres de la famille IRS. La dérégulation de la signalisation d’INSR est fortement associée à la résistance à l’insuline et à la biologie des maladies métaboliques, et elle est également pertinente pour les altérations de la signalisation de croissance observées dans de multiples tissus et microenvironnements tumoraux.

INSR/Insulin Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de INSR sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

INSR/Insulin Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus INSR dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription INSR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de INSR/Insulin Receptor. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus INSR natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de INSR/Insulin Receptor au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie INSR/Insulin Receptor dans les cellules tumorales présentant une expression de INSR silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.