INSIG-2 Double Nickase Plasmid (h): sc-402255-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das INSIG-2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- INSIG-2 Double-Nickase-Plasmid (h) und INSIG-2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf INSIG2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
INSIG-2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402255-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
INSIG-2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402255-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
INSIG2 kodiert INSIG-2, ein Membranprotein des endoplasmatischen Retikulums, das die Cholesterin- und Fettsäurebiosynthese durch die Regulation der SREBP-Prozessierung bremst. INSIG-2 bindet das sterol-sensing Protein SCAP und fördert unter sterolreichen Bedingungen die Retention des SCAP–SREBP-Komplexes im ER, wodurch Transkriptionsprogramme begrenzt werden, die den Lipidstoffwechsel und die Membranbiogenese steuern. Über Interaktionen mit der Ubiquitin-Ligase-Maschinerie trägt INSIG-2 außerdem zum regulierten Abbau der HMG-CoA-Reduktase bei und verknüpft so die Sterolverfügbarkeit mit dem Fluss durch den Mevalonatweg. Eine veränderte Expression oder Regulation von INSIG2 wurde mit dyslipidämiebezogenen Merkmalen, Insulinresistenz und Phänotypen metabolischer Erkrankungen in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der Lipidhomöostase in menschlichen Zellen macht.
INSIG-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des INSIG2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von INSIG2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die INSIG2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit INSIG2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.