Plasmide CRISPR/Cas9 KO Inhibin β-C (m): sc-421132

Présentation

Inhbc code la sous-unité bêta‑C de l’inhibine chez la souris, un membre de la superfamille TGF‑β pouvant contribuer à la formation des ligands activine et inhibine, influençant ainsi la signalisation dépendante de SMAD. En modulant l’activité de la voie TGF‑β/activine, l’inhibine β‑C est impliquée dans la régulation des programmes de différenciation cellulaire, l’homéostasie tissulaire et le contrôle, dépendant du contexte, de la prolifération. Un déséquilibre de la signalisation activine/inhibine est associé à des réponses inflammatoires et fibrosantes dérégulées et a été lié à des modifications de processus reproductifs et endocriniens dans de multiples systèmes modèles. Dans la recherche chez la souris, Inhbc constitue un point d’entrée exploitable pour disséquer la disponibilité des ligands et les réponses transcriptionnelles en aval au sein des réseaux de la superfamille TGF‑β.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Inhibin β-C (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Inhbc dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Inhbc, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Inhbc à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Inhibin β-C.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Inhbc pour l'étude de la signalisation de Inhibin β-C, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Inhbc essentiels à la fonction de Inhibin β-C
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Inhbc pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Inhibin β-C plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Inhibin β-C plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Inhbc. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Inhibin β-C plasmide HDR (m) et le Inhibin β-C (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Inhbc pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Inhbc définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.