Plasmide CRISPR/Cas9 KO ING2 (h): sc-404193

Présentation

ING2 (inhibitor of growth family member 2) est une protéine nucléaire associée à la suppression tumorale, qui agit comme lecteur de la chromatine via son doigt PHD C-terminal, en reconnaissant H3K4me3 et en coordonnant des programmes transcriptionnels liés à la signalisation des dommages à l’ADN et au contrôle du cycle cellulaire. Elle participe à la régulation épigénétique en recrutant des complexes d’histone acétyltransférases/désacétylases et en modulant des réponses au stress dépendantes de p53, influençant ainsi l’apoptose, la sénescence et la stabilité du génome. ING2 a été associée à des voies qui contrôlent l’accessibilité de la chromatine et le recrutement de facteurs de réparation après un stress génotoxique. Des altérations de l’expression ou de la fonction d’ING2 ont été rapportées dans de multiples contextes cancéreux et sont étudiées pour leur contribution, au niveau moléculaire, à la transformation oncogénique, au potentiel métastatique et aux mécanismes de résistance aux traitements.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ING2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ING2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ING2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ING2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ING2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ING2 pour l'étude de la signalisation de ING2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ING2 essentiels à la fonction de ING2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ING2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ING2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ING2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ING2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ING2 plasmide HDR (h) et le ING2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ING2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ING2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.