Plasmide CRISPR d'Activation (h) ING2: sc-404193-ACT

ING2 (inhibitor of growth family member 2) est une protéine suppresseur de tumeur associée à la chromatine, qui agit comme lectrice de la triméthylation de la lysine 4 de l’histone H3 (H3K4me3) via son domaine PHD (« PHD finger »), contribuant ainsi à coupler l’état épigénétique au contrôle transcriptionnel. Dans les cellules humaines, ING2 participe au remodelage de la chromatine et à l’équilibre acétylation/désacétylation des histones grâce à des interactions avec des complexes contenant des HDAC, influençant de ce fait la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et l’apoptose. Elle interagit également avec la signalisation de stress dépendante de p53 et contribue au maintien de la stabilité génomique. Des altérations de l’expression ou de la fonction d’ING2 ont été associées à une prolifération dérégulée et à une reprogrammation épigénétique observées dans de multiples contextes cancéreux, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour les études de la signalisation oncogénique et de la régulation de la chromatine.

ING2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ING2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ING2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ING2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ING2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ING2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ING2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ING2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ING2 dans les cellules tumorales présentant une expression de ING2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.