INDOL1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-431618-ACT

Das Mausgen *Ido2* kodiert Indolamin-2,3-Dioxygenase 2 (INDOL1), ein hämabhängiges Enzym, das im Kynureninweg die oxidative Spaltung von Tryptophan zu N‑Formylkynurenin katalysiert. Durch die Modulation der intrazellulären Tryptophanverfügbarkeit und die Erzeugung bioaktiver Kynureninmetaboliten beeinflusst INDOL1 immunmetabolische Signalwege, die Redoxhomöostase und entzündungsbezogene Genprogramme in myeloiden und epithelialen Kontexten. Die Aktivität von *Ido2* wurde zusammen mit verwandten tryptophanabbauenden Enzymen in Mechanismen untersucht, die Antigenpräsentation, toleranzähnliche Reaktionen und Zytokinnetzwerke prägen. Eine dysregulierte Flussrate im Kynureninweg und ein veränderter Tryptophanstoffwechsel sind mit Immundysfunktionen und entzündungsassoziierten Krankheitsmodellen verbunden, was *Ido2* als nützlichen Knotenpunkt zur Untersuchung dieses Signalwegs stützt.

INDOL1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Ido2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

INDOL1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Ido2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Ido2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen INDOL1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Ido2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von INDOL1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des INDOL1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Ido2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.