Plasmide CRISPR d'Activation (h) IMPDH2: sc-410835-ACT

L’IMPDH2 humain code l’inosine monophosphate déshydrogénase 2, une enzyme limitante de la biosynthèse de novo des nucléotides guanyliques qui convertit l’IMP en XMP et contribue au maintien des réserves cellulaires de GTP. En contrôlant la disponibilité des nucléotides, IMPDH2 soutient la synthèse de l’ADN et de l’ARN, la biogenèse des ribosomes et la prolifération, ce qui l’associe aux programmes de remodelage métabolique qui accompagnent l’activation immunitaire et la croissance oncogénique. L’activité d’IMPDH2 s’inscrit à l’interface du métabolisme des purines et de voies plus larges d’homéostasie des nucléotides, qui influencent les réponses au stress réplicatif et la capacité transcriptionnelle. Des altérations d’expression ou une dépendance accrue à IMPDH2 ont été rapportées dans divers cancers ainsi que dans des contextes d’expansion de cellules immunitaires et inflammatoires, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier la régulation métabolique de l’état cellulaire.

IMPDH2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IMPDH2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IMPDH2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IMPDH2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IMPDH2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IMPDH2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IMPDH2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IMPDH2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IMPDH2 dans les cellules tumorales présentant une expression de IMPDH2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.