Plasmide CRISPR/Cas9 KO IMPACT (m): sc-421126

Présentation

IMPACT (inositol monophosphatase domain containing 1) code une protéine cytoplasmique conservée, impliquée dans le contrôle de la traduction et l’adaptation cellulaire à la disponibilité des nutriments. Dans les cellules de mammifères, IMPACT a été associé à la modulation de la réponse intégrée au stress, notamment via la régulation de la voie eIF2α et de programmes de traduction induits par le stress qui influencent la prolifération et la survie en situation de stress métabolique. Par ces liens, Impact est étudié dans des contextes où la protéostasie et la détection des acides aminés influencent la fonction neuronale, le développement et la résilience au stress, offrant un point d’entrée moléculaire pour examiner comment les points de contrôle traductionnels contribuent à des phénotypes pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IMPACT (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Impact dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Impact, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Impact à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IMPACT.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Impact pour l'étude de la signalisation de IMPACT, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Impact essentiels à la fonction de IMPACT
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Impact pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IMPACT plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le IMPACT plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Impact. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IMPACT plasmide HDR (m) et le IMPACT (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Impact pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Impact définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.