Plasmide Double Nickase (h) IMP-1/IGF2BP1: sc-401703-NIC

IGF2BP1 (IMP-1) est une protéine de liaison à l’ARN conservée qui reconnaît les transcrits modifiés par m6A et régule la localisation, la stabilité et la traduction des ARNm de gènes associés à la croissance et à la motilité. Grâce à des interactions avec le cytosquelette et des complexes ribonucléoprotéiques, elle contribue à coordonner des programmes post‑transcriptionnels liés à la prolifération, à la migration et à la plasticité épithélio‑mésenchymateuse, notamment via des effets en aval sur les sorties de signalisation PI3K–AKT et MAPK. L’expression d’IGF2BP1 est fréquemment augmentée dans de nombreux types de tumeurs et a été associée à un comportement invasif ainsi qu’à des phénotypes métaboliques et de réponse au stress altérés. En conséquence, IGF2BP1 est largement étudiée en biologie du cancer, en épitranscriptomique de l’ARN et dans les mécanismes couplant le devenir de l’ARN aux transitions d’état cellulaire.

IMP-1/IGF2BP1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IGF2BP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IGF2BP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IGF2BP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IGF2BP1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.