Plasmide CRISPR d'Activation (h) IMP-1/IGF2BP1: sc-401703-ACT

IGF2BP1 (IMP-1) est une protéine de liaison à l’ARN qui reconnaît la N6‑méthyladénosine (m6A) ainsi que d’autres caractéristiques de séquence et/ou de structure afin de réguler la localisation, la stabilité et la traduction des ARNm au cours du développement et lors des réponses cellulaires au stress. En modulant le devenir de transcrits liés à la croissance et au métabolisme, IGF2BP1 influence des programmes contrôlant la prolifération, la migration et la transition épithélio‑mésenchymateuse, et interagit avec des réseaux de signalisation tels que PI3K–AKT–mTOR et MAPK via l’expression de cibles en aval. Une expression aberrante d’IGF2BP1 a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux et est associée à une altération du contrôle post‑transcriptionnel d’ARNm oncogéniques et pro‑survie. De plus, la régulation de l’ARN dépendante d’IGF2BP1 est pertinente pour les phénotypes de type « stem » et le remodelage de l’état cellulaire, ce qui soutient des études mécanistiques des réseaux de régulation génique.

IMP-1/IGF2BP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IGF2BP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IMP-1/IGF2BP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IGF2BP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IGF2BP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IMP-1/IGF2BP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IGF2BP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IMP-1/IGF2BP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IMP-1/IGF2BP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de IGF2BP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.