Plasmide CRISPR d'Activation (h) IL-9: sc-403774-ACT

L’IL9 humain code l’interleukine‑9 (IL‑9), une cytokine pléiotrope produite par des lymphocytes T activés, notamment des sous‑populations Th9, qui façonne les réponses immunitaires au niveau des barrières muqueuses. L’IL‑9 transmet son signal via le complexe récepteur de l’IL‑9, activant les voies JAK/STAT, en particulier STAT5, et s’insère dans des programmes plus larges induits par les cytokines qui influencent la différenciation des lymphocytes, la biologie des mastocytes et la fonction des cellules épithéliales. Une activité dérégulée de l’IL‑9 a été impliquée dans des processus immunitaires inflammatoires et allergiques, ainsi que dans la modulation du microenvironnement tumoral et immunitaire, faisant d’IL9 un nœud utile pour étudier les réseaux de cytokines et la communication croisée entre cellules immunitaires et stroma. In vitro, l’IL‑9 est couramment étudiée pour ses effets sur les états d’activation immunitaire, les profils de sécrétion de cytokines et les programmes transcriptionnels en aval.

IL-9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IL9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IL9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IL9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IL9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-9 dans les cellules tumorales présentant une expression de IL9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.