IL-8RB CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401404-ACT

CXCR2 kodiert den Interleukin‑8‑Rezeptor Beta (IL‑8RB), einen siebenfach transmembranären GPCR, der ELR+‑CXC‑Chemokine wie CXCL8/IL‑8 bindet und so Chemotaxis, Adhäsion und Aktivierung von Neutrophilen sowie anderen myeloischen Zellen steuert. Die Rezeptorbindung löst eine Gαi‑abhängige Signalübertragung aus, die den intrazellulären Calciumfluss moduliert und die Signalwege MAPK/ERK, PI3K–AKT und NF‑κB aktiviert, wodurch inflammatorische Genexpression und Zytoskelett‑Remodelling geprägt werden. Die CXCR2‑Signalgebung koordiniert die Leukozytenmigration, angiogene Signale und Gewebereaktionen auf Verletzungen; eine fehlregulierte Aktivität von Chemokinrezeptoren ist mit chronischen Entzündungen und der tumorassoziierten Rekrutierung von Immunzellen verbunden. Daher wird CXCR2/IL‑8RB in Modellen entzündlicher Mikroumgebungen, der Myeloidzell‑Biologie und der chemokingetriebenen Zellmigration breit untersucht.

IL-8RB Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CXCR2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IL-8RB Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CXCR2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CXCR2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IL-8RB-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CXCR2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IL-8RB-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IL-8RB-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CXCR2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.