IL-8RA Double Nickase Plasmid (h): sc-401645-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IL-8RA Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IL-8RA Double-Nickase-Plasmid (h) und IL-8RA Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CXCR1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: IL-8RA: sc-7303
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IL-8RA Double Nickase Plasmid (h) | sc-401645-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IL-8RA Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401645-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CXCR1 kodiert den Interleukin-8-Rezeptor alpha (IL-8RA), einen siebenfach transmembranen GPCR, der ELR+ CXC-Chemokine wie CXCL8/IL-8 bindet und so die Chemotaxis, Adhäsion, Degranulation und den oxidativen Burst von Neutrophilen koordiniert. Nach Ligandenbindung koppelt IL-8RA an G-Proteine und aktiviert PLCβ/Ca²⁺-Flux, PI3K–AKT-, MAPK/ERK- sowie Small-GTPase-Signalwege, wodurch Zytoskelett-Remodelling und gerichtete Migration gesteuert werden. Die CXCR1-Aktivität ist in die angeborene Immunüberwachung und in Netzwerke entzündlicher Zytokine eingebunden und beeinflusst den Leukozytentransport in infizierten oder geschädigten Geweben. Eine fehlregulierte CXCR1-Signalgebung wurde mit chronisch-entzündlichen Erkrankungen und tumorassoziierter Entzündung in Verbindung gebracht, unter anderem über Effekte auf die Rekrutierung myeloider Zellen und die Ausbildung entzündlicher Mikromilieus.
IL-8RA Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CXCR1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CXCR1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CXCR1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CXCR1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.