Plasmide CRISPR d'Activation (h) IL-7R: sc-401536-ACT

IL7R humain code la chaîne alpha du récepteur de l’interleukine‑7 (IL‑7R/CD127), une sous‑unité de récepteur aux cytokines qui s’associe à la chaîne γ commune pour assurer une signalisation dépendante de l’IL‑7, essentielle à la thymopoïèse, à la survie des lymphocytes T périphériques et à la prolifération homéostatique. L’engagement d’IL‑7R active JAK1/JAK3 et, en aval, des programmes transcriptionnels dépendants de STAT5, avec en outre un couplage aux voies PI3K–AKT et MAPK qui façonnent le métabolisme et la différenciation des lymphocytes. La dynamique d’expression d’IL7R contribue à définir des sous‑populations lymphocytaires et des états d’activation immunitaire, et des altérations de la régulation ou de la signalisation d’IL7R ont été associées à des phénotypes de dérégulation immune ainsi qu’à des études d’association génétique dans l’auto‑immunité et les maladies inflammatoires. En tant que récepteur de surface cellulaire, IL‑7R est fréquemment étudié sous l’angle du trafic des récepteurs, de la cinétique de réponse au ligand et du contrôle transcriptionnel de l’engagement des lignages immunitaires.

IL-7R Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IL7R sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-7R Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IL7R dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IL7R, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-7R. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IL7R natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-7R au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-7R dans les cellules tumorales présentant une expression de IL7R silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.