Plasmide CRISPR d'Activation (h) IL-7: sc-402210-ACT

Le gène humain **IL7** code l’interleukine-7 (IL‑7), une cytokine d’origine stromale et épithéliale qui transmet ses signaux via le complexe récepteur de l’IL‑7 afin de soutenir la survie, la prolifération et la différenciation des lymphocytes. La liaison de l’IL‑7 active la signalisation JAK/STAT, en particulier STAT5, et s’intègre aux voies PI3K–AKT et MAPK pour réguler la capacité métabolique et les programmes anti‑apoptotiques dans les compartiments des lymphocytes T et B. Cet axe est essentiel à la thymopoïèse, à l’homéostasie des lymphocytes T périphériques et au maintien de la diversité du répertoire immunitaire. Une dérégulation de la signalisation IL‑7/IL7R a été impliquée dans des altérations du développement immunitaire ainsi que dans des mécanismes de maladies inflammatoires ou à médiation immunitaire, faisant d’**IL7** une cible fréquente des études sur la biologie des lymphocytes et les réseaux de signalisation immunitaire.

IL-7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IL7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IL7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IL7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IL7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-7 dans les cellules tumorales présentant une expression de IL7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.