Plasmide CRISPR d'Activation (h) IL-6Rα: sc-400582-ACT

IL6R code la chaîne alpha du récepteur humain de l’interleukine-6 (IL‑6Rα), un composant de liaison au ligand qui conditionne la réactivité cellulaire à l’IL‑6 et coordonne la signalisation via le complexe corécepteur gp130. L’engagement d’IL‑6Rα favorise l’activation en aval des voies JAK/STAT3, MAPK/ERK et PI3K/AKT, modulant les réponses de phase aiguë, la différenciation des leucocytes et l’homéostasie tissulaire. IL‑6Rα participe également aux modes de signalisation classique et de trans‑signalisation, qui influencent la dynamique des réseaux de cytokines et les seuils inflammatoires au sein des compartiments immunitaires et stromaux. Une expression ou une signalisation d’IL6R dérégulée est impliquée dans l’inflammation chronique et l’auto‑immunité, et fait l’objet de nombreuses études en oncologie et en biologie cardiovasculaire en tant que moteur du remodelage du microenvironnement et de phénotypes inflammatoires systémiques.

IL-6Rα Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IL6R sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-6Rα Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IL6R dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IL6R, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-6Rα. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IL6R natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-6Rα au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-6Rα dans les cellules tumorales présentant une expression de IL6R silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.