Plasmide Double Nickase (h) IL-3Rα: sc-437304-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) IL-3Rα correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide IL-3Rα Double Nickase (h) et le plasmide IL-3Rα Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant IL3RA. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (h) IL-3Rα | sc-437304-NIC | 20 µg | $410.00 |
IL3RA code la chaîne alpha du récepteur de l’interleukine-3 (IL-3Rα, CD123), composant de liaison au ligand du complexe récepteur de l’IL-3, qui s’hétérodimérise avec la chaîne bêta commune (CSF2RB) pour initier la signalisation. L’engagement d’IL-3Rα soutient des programmes de survie, de prolifération et de différenciation dans les progéniteurs hématopoïétiques et les cellules de la lignée myéloïde, avec une activation en aval des voies JAK/STAT, PI3K–AKT et RAS–MAPK. Les altérations de l’expression d’IL3RA sont utilisées pour étudier la dérégulation de la signalisation des cytokines, l’engagement de lignée et l’homéostasie des cellules immunitaires dans des contextes de maladies hématologiques. En tant que récepteur de surface cellulaire à expression restreinte, IL-3Rα est fréquemment étudié comme marqueur et moteur fonctionnel dans des modèles de biologie myéloïde aberrante et de signalisation inflammatoire.
IL-3Rα Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IL3RA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IL3RA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IL3RA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IL3RA.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.