IL-28B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406651-ACT

O IFNL3 humano codifica o interferon lambda 3 (IL-28B), um interferon do tipo III que sinaliza através do complexo receptor IFNLR1/IL10RB para ativar as vias JAK–STAT e induzir genes estimulados por interferon (ISGs), que moldam as defesas antivirais intrínsecas em superfícies epiteliais e de barreira. Programas transcricionais conduzidos por IL-28B regulam o reconhecimento imune inato, a apresentação de antígenos e o tônus inflamatório, intersetando-se com redes mediadas por STAT1/STAT2–IRF9 (ISGF3) e por IRFs. Variações na expressão de IFNL3 têm sido associadas a respostas diferenciais do hospedeiro à infecção viral e à inflamação mediada pelo sistema imune, tornando-o um ponto útil para estudar a comunicação cruzada entre citocinas e a regulação das vias de interferon. Em modelos celulares, modular IFNL3 ajuda a investigar a sinalização imune epitelial, mecanismos de restrição viral e a dinâmica downstream de ISGs sem alterar diretamente componentes do patógeno.

IL-28B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IFNL3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-28B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IFNL3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IFNL3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-28B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IFNL3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-28B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-28B em células tumorais com expressão de IFNL3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.