Plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-28A (h): sc-405375

Présentation

IFNL2 code l’interféron lambda 2 (IL‑28A), un interféron de type III qui transmet ses signaux via le complexe récepteur IFNLR1/IL10RB afin d’activer les voies JAK–STAT et d’induire l’expression de gènes stimulés par l’interféron. Cette cytokine soutient la défense antivirale épithéliale et muqueuse et module les réponses immunitaires innées et adaptatives en influençant la production de chimiokines et la présentation d’antigènes. L’activité d’IL‑28A s’articule avec la signalisation des récepteurs de reconnaissance de motifs, notamment les voies des TLR et des récepteurs de type RIG‑I, pour coordonner des programmes transcriptionnels antiviraux. Une signalisation IFNL2 dérégulée et des variations génétiques ont été associées à des issues différentes lors d’infections virales et de processus inflammatoires, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques des interactions hôte–pathogène et de la régulation immunitaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-28A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène IFNL2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du IFNL2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert IFNL2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IL-28A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en IFNL2 pour l'étude de la signalisation de IL-28A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de IFNL2 essentiels à la fonction de IL-28A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de IFNL2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IL-28A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le IL-28A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus IFNL2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IL-28A plasmide HDR (h) et le IL-28A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie IFNL2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles IFNL2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.