Plasmide CRISPR d'Activation (h) IL-23: sc-401374-ACT

IL23A code la sous-unité p19 de l’interleukine 23 (IL‑23), une cytokine hétérodimérique qui signale via le complexe récepteur de l’IL‑23 pour activer les voies JAK/STAT, en particulier STAT3, et renforcer des programmes d’expression génique pro‑inflammatoires. L’IL‑23 favorise l’expansion et la stabilisation des réponses Th17 et soutient la production de médiateurs effecteurs tels que l’IL‑17 et l’IL‑22, reliant la détection innée à l’immunité adaptative au niveau des tissus barrières. Une dérégulation de la signalisation IL23A/IL‑23 est impliquée dans l’activation immunitaire chronique et la pathologie inflammatoire, avec une forte pertinence pour la biologie des maladies auto‑immunes et inflammatoires. In vitro, IL23A constitue un nœud clé pour étudier le dialogue induit par les cytokines entre les cellules myéloïdes, les cellules T et les compartiments épithéliaux.

IL-23 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IL23A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-23 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IL23A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IL23A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-23. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IL23A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-23 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-23 dans les cellules tumorales présentant une expression de IL23A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.