Plasmide CRISPR d'Activation (h) IL-21: sc-416409-ACT

Le gène humain IL21 code l’interleukine-21 (IL-21), une cytokine pléiotrope produite principalement par des sous-populations de lymphocytes T CD4+ activés, telles que les cellules T auxiliaires folliculaires (Tfh) et les cellules Th17. L’IL-21 transmet son signal via le complexe récepteur de l’IL-21 associé à la chaîne γ commune, activant les voies JAK/STAT, avec des programmes transcriptionnels marqués dépendants de STAT3 qui orientent la commutation isotypique des cellules B et la différenciation en plasmocytes, favorisent la fonction des lymphocytes T CD8+ et modulent la cytotoxicité des cellules NK. En coordonnant la dynamique des centres germinatifs et les réponses effectrices immunitaires périphériques, l’IL-21 contribue à l’homéostasie immunitaire et au remodelage inflammatoire. Une expression ou une signalisation de l’IL-21 dérégulée est fréquemment étudiée dans les contextes d’auto-immunité, d’inflammation chronique, de dysfonction immunitaire associée aux infections et d’immunologie tumorale, en tant que déterminant de la différenciation lymphocytaire et de l’équilibre des réseaux de cytokines.

IL-21 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IL21 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-21 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IL21 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IL21, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-21. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IL21 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-21 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-21 dans les cellules tumorales présentant une expression de IL21 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.