Plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-1ra (h): sc-401313

Présentation

L’IL1RN humain code l’antagoniste du récepteur de l’interleukine‑1 (IL‑1ra), un régulateur sécrété qui inhibe de manière compétitive la liaison d’IL‑1α et d’IL‑1β au récepteur de l’IL‑1 de type I, atténuant ainsi la signalisation en aval dépendante de MyD88. En limitant l’activation des voies NF‑κB et MAPK induite par l’IL‑1, l’IL‑1ra module des programmes transcriptionnels qui contrôlent la production de cytokines, le recrutement des leucocytes et les réponses inflammatoires de phase aiguë. Une activité d’IL1RN dérégulée est associée à une signalisation innée aberrante et à une modification du seuil inflammatoire, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’autoinflammation, des voies liées à l’arthrite et, plus largement, de la régulation des réseaux de cytokines. IL1RN est également utilisé comme nœud marqueur pour étudier la dynamique de l’axe inflammasome‑IL‑1 et le contrôle par rétroaction dans les macrophages, les cellules épithéliales et les compartiments stromaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-1ra (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène IL1RN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du IL1RN, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert IL1RN à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IL-1ra.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en IL1RN pour l'étude de la signalisation de IL-1ra, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de IL1RN essentiels à la fonction de IL-1ra
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de IL1RN pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IL-1ra plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le IL-1ra plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus IL1RN. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IL-1ra plasmide HDR (h) et le IL-1ra (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie IL1RN pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles IL1RN définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.