Plasmide CRISPR d'Activation (h) IL-18Rβ: sc-411213-ACT

IL18RAP code la protéine accessoire du récepteur de l’IL‑18 (IL‑18Rβ), un corécepteur qui s’associe à IL18R1 pour former le complexe récepteur fonctionnel de l’IL‑18 sur les cellules immunitaires et stromales. Lors de la liaison de l’IL‑18, cet hétérodimère déclenche une signalisation dépendante de MyD88, activant les cascades IRAK/TRAF6, ce qui entraîne l’activation des voies NF‑κB et MAPK et façonne des programmes inflammatoires orientés vers l’IFN‑γ. L’activité d’IL‑18Rβ contribue à la régulation du dialogue entre immunité innée et adaptative, notamment les réponses effectrices des cellules NK et T ainsi que l’amplification des réseaux de cytokines. Des altérations de l’expression ou de la signalisation d’IL18RAP ont été associées à des pathologies à médiation immunitaire et à des contextes de maladies inflammatoires dans lesquels une dérégulation de l’axe IL‑18 est impliquée.

IL-18Rβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IL18RAP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-18Rβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IL18RAP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IL18RAP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-18Rβ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IL18RAP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-18Rβ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-18Rβ dans les cellules tumorales présentant une expression de IL18RAP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.