Plasmide CRISPR d'Activation (h) IL-17RB: sc-404114-ACT

IL17RB code le récepteur B de l’interleukine‑17 (IL‑17RB), un récepteur de cytokines transmembranaire de type I qui s’associe à IL17RA pour transmettre les signaux des ligands de la famille IL‑17, en particulier l’IL‑25 (IL‑17E). La liaison au récepteur recrute des protéines adaptatrices telles qu’ACT1 afin d’activer les voies de signalisation NF‑κB et MAPK, reliant la détection par les cellules épithéliales et stromales à la production de chimiokines, à l’inflammation des muqueuses et à une polarisation immunitaire de type 2. L’activité d’IL‑17RB influence le dialogue entre les tissus des voies aériennes et autres tissus barrières, les cellules myéloïdes et les sous‑populations lymphoïdes, modulant les réponses aux allergènes et aux helminthes ainsi que, plus largement, le remodelage inflammatoire. Une expression ou une signalisation d’IL17RB dérégulée a été associée à des états inflammatoires chroniques et à des modifications du microenvironnement immunitaire lié aux tumeurs, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la signalisation immunitaire et de la communication intercellulaire.

IL-17RB Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IL17RB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-17RB Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IL17RB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IL17RB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-17RB. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IL17RB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-17RB au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-17RB dans les cellules tumorales présentant une expression de IL17RB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.