Plasmide CRISPR d'Activation (m) IL-15Rα: sc-421090-ACT

Il15ra code la chaîne alpha du récepteur de l’interleukine-15 murine (IL-15Rα), un composant de liaison à haute affinité qui présente l’IL-15 en trans aux complexes IL-2/15Rβ–γc sur les cellules immunitaires voisines. Cet axe est essentiel au développement et à la survie des cellules NK, à l’homéostasie des lymphocytes T CD8+ mémoire, et à la modulation des réponses immunitaires innées et adaptatives via la signalisation JAK/STAT. La signalisation dépendante d’IL-15Rα influence le trafic des lymphocytes et les programmes d’activation, ce qui rend la régulation de Il15ra pertinente pour l’étude de l’inflammation, des pathologies immuno-médiées et de l’immunologie des tumeurs. Une activité IL-15/IL-15Rα altérée a été associée à une dérégulation des réseaux de cytokines et à une expansion aberrante des cellules immunitaires dans divers modèles de maladies.

IL-15Rα Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Il15ra sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-15Rα Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Il15ra dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Il15ra, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-15Rα. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Il15ra natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-15Rα au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-15Rα dans les cellules tumorales présentant une expression de Il15ra silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.