Plasmide Double Nickase (h) IL-12B p40: sc-401407-NIC

IL12B code la sous-unité p40 de l’IL‑12B, un composant commun des cytokines hétérodimériques IL‑12 (p35/p40) et IL‑23 (p19/p40), qui coordonnent les réponses immunitaires innée et adaptative. Via la signalisation des récepteurs de l’IL‑12 et de l’IL‑23, les cytokines contenant p40 activent les voies JAK/STAT, favorisent la polarisation Th1/Th17 et soutiennent les programmes antimicrobiens dépendants de l’IFN‑γ ainsi que l’expression de gènes inflammatoires. L’expression d’IL12B dans les cellules présentatrices d’antigènes est étroitement régulée par les signaux issus des récepteurs de reconnaissance de motifs, notamment via les voies TLR et NF‑κB, reliant la détection microbienne à la production de cytokines. Une activité dérégulée d’IL12B a été impliquée dans la physiopathologie des inflammations chroniques et des maladies auto-immunes, ainsi que dans des altérations de la défense de l’hôte, ce qui en fait une cible fréquente des études mécanistiques en immunologie et dans les modèles d’inflammation.

IL-12B p40 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IL12B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IL12B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IL12B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IL12B.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.