Plasmide CRISPR d'Activation (h) IL-12B p40: sc-401407-ACT

L’IL12B humain code la sous-unité p40, commune aux cytokines hétérodimériques IL-12 (p35/p40) et IL-23 (p19/p40), ce qui place IL-12B au cœur de la communication immunitaire entre l’inné et l’adaptatif. La signalisation dépendante de p40 via les complexes IL-12R et IL-23R active les voies JAK/STAT, orientant la polarisation Th1 et Th17, l’induction de l’interféron-γ et les réseaux de cytokines inflammatoires dans les cellules myéloïdes et lymphoïdes. Des altérations de l’expression d’IL12B ou des déséquilibres de cette voie ont été associées à une dérégulation des défenses de l’hôte et à des phénotypes inflammatoires chroniques, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biologie des infections, de l’inflammation granulomateuse et des pathologies immunitaires médiées par les cytokines. Ce gène est fréquemment étudié dans des modèles d’activation des macrophages et des cellules dendritiques, ainsi que dans des systèmes de co-culture mesurant la différenciation et la fonction effectrice des lymphocytes T.

IL-12B p40 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IL12B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-12B p40 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IL12B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IL12B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-12B p40. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IL12B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-12B p40 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-12B p40 dans les cellules tumorales présentant une expression de IL12B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.