Plasmide Double Nickase (h) IL-10Rβ: sc-404666-NIC

IL10RB code la sous-unité bêta du récepteur de l’interleukine-10 (IL‑10Rβ), une chaîne accessoire essentielle partagée par plusieurs récepteurs de cytokines de classe II, notamment ceux de l’IL‑10, de l’IL‑22, de l’IL‑26 et des interférons de type III (IFN‑λ). Après liaison du ligand, IL‑10Rβ s’associe à la sous-unité alpha spécifique du ligand correspondante afin de permettre l’activation de JAK1/TYK2 et la signalisation STAT en aval, façonnant des programmes transcriptionnels qui régulent l’inflammation, la fonction de barrière épithéliale et les réponses antivirales. Cette sous-unité de récepteur est donc centrale pour l’homéostasie immunitaire induite par les cytokines au niveau des surfaces muqueuses ainsi que dans les compartiments myéloïdes et lymphoïdes. Les perturbations de la signalisation dépendante d’IL10RB sont fréquemment étudiées dans le contexte de réponses cytokiniques dérégulées, pertinentes pour la biologie des infections, les pathologies inflammatoires et les mécanismes à médiation immunitaire.

IL-10Rβ Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IL10RB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IL10RB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IL10RB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IL10RB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.