IL-10Rα Plasmide Double Nickase (h): sc-402486-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IL-10Rα Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il IL-10Rα Double Nickase Plasmid (h) e il IL-10Rα Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira IL10RA. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: IL-10Rα Antibody (A-3): sc-365374
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IL-10Rα Plasmide Double Nickase (h) | sc-402486-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IL-10Rα Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402486-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
IL10RA codifica la catena alfa del recettore dell’interleuchina-10 (IL-10Rα), un componente di legame ad alta affinità necessario per la segnalazione antinfiammatoria dipendente da IL-10. Dopo il legame del ligando, IL-10Rα si associa a IL10RB per attivare JAK1/TYK2 e i programmi trascrizionali a valle mediati da STAT3, che limitano la produzione di citochine pro-infiammatorie e modulano la funzione delle cellule presentanti l’antigene. Questa via contribuisce all’omeostasi immunitaria mieloide e linfoide in sedi mucosali e sistemiche, influenzando la polarizzazione dei macrofagi, la maturazione delle cellule dendritiche e le risposte delle cellule T. Alterazioni genetiche o funzionali di IL10RA sono associate a disregolazione immunitaria e fenotipi di malattie infiammatorie, a supporto della sua rilevanza negli studi sulla segnalazione citochinica, sulle interazioni ospite–microbioma e sull’immunità di barriera.
IL-10Rα Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IL10RA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IL10RA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IL10RA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IL10RA interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.