Plasmide CRISPR d'Activation (m) IL-10: sc-421076-ACT

Le gène murin Il10 code l’interleukine‑10 (IL‑10), une cytokine anti‑inflammatoire pléiotrope qui freine l’activation de l’immunité innée et adaptative afin de préserver l’homéostasie tissulaire. La signalisation de l’IL‑10 via son récepteur active JAK1/TYK2 et STAT3 pour supprimer la production de cytokines pro‑inflammatoires, limiter la maturation des cellules présentatrices d’antigène et moduler la polarisation des lymphocytes T ainsi que les programmes régulateurs. Cet axe est central pour la tolérance immunitaire au niveau des muqueuses et la résolution de l’inflammation, avec des implications dans des pathologies à médiation immunitaire telles que l’inflammation de type colite, l’immunorégulation associée aux infections chroniques et l’immunosuppression du microenvironnement tumoral dans des modèles expérimentaux. Une activité altérée de l’IL‑10 est donc largement étudiée dans les macrophages, les cellules dendritiques, les lymphocytes B et les lymphocytes T afin de comprendre les réseaux de cytokines et les circuits de signalisation inflammatoire.

IL-10 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Il10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-10 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Il10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Il10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Il10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-10 dans les cellules tumorales présentant une expression de Il10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.