IL-1 beta/IL1B Double Nickase Plasmid (h): sc-400078-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IL-1 beta/IL1B Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IL-1 beta/IL1B Double-Nickase-Plasmid (h) und IL-1 beta/IL1B Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf IL1B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: IL-1 beta/IL1B: sc-12742
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IL-1 beta/IL1B Double Nickase Plasmid (h) | sc-400078-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IL-1 beta/IL1B Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400078-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes **IL1B** kodiert Interleukin‑1 beta (IL‑1β), ein stark proinflammatorisches Zytokin, das als inaktiver Vorläufer gebildet und nach Aktivierung des Inflammasoms sowie durch Caspase‑1‑Aktivität proteolytisch zur reifen Form verarbeitet wird. Die IL‑1β‑Signalgebung über **IL‑1R1** und akzessorische Proteine löst **MyD88**‑abhängige Kaskaden aus, darunter die **NF‑κB**‑ und **MAPK**‑Signalwege, und induziert so sekundäre Zytokine, Chemokine und Adhäsionsmoleküle, die angeborene Immunantworten koordinieren. **IL1B** ist eng mit der Rekrutierung von Entzündungszellen, der Fieberreaktion und dem Gewebeumbau verknüpft; eine fehlregulierte Expression ist mit chronisch‑entzündlicher und autoimmuner Pathobiologie assoziiert. Als zentraler Knoten in Zytokinnetzwerken wird **IL1B** breit in der Makrophagenbiologie, der Inflammasom‑Signalgebung sowie in Modellen steriler Entzündung und infektionsgetriebener Immunaktivierung untersucht.
IL-1 beta/IL1B Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des IL1B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von IL1B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die IL1B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit IL1B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.