Plasmide CRISPR d'Activation (h) IKK-ε: sc-401786-ACT

IKBKE code IKK-ε, une kinase IκB non canonique qui intègre la détection immunitaire innée aux programmes transcriptionnels inflammatoires. IKK-ε phosphoryle des intermédiaires clés de signalisation afin de favoriser l’activation d’IRF3/IRF7 et l’expression de gènes dépendante de NF-κB, modulant ainsi les réponses à l’interféron de type I et la production de cytokines. Grâce à des interactions croisées avec les voies en aval des TLR, des récepteurs de type RIG-I et de STING, IKK-ε influence les défenses antivirales, la survie cellulaire et la signalisation liée au stress métabolique. Une activité dérégulée d’IKBKE a été associée à des états inflammatoires persistants et a été étudiée dans le contexte de réseaux de signalisation associés aux tumeurs et du remodelage du microenvironnement immunitaire.

IKK-ε Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IKBKE sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IKK-ε Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IKBKE dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IKBKE, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IKK-ε. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IKBKE natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IKK-ε au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IKK-ε dans les cellules tumorales présentant une expression de IKBKE silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.