IKK-ε Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401786-ACT

IKBKE codifica a IKK-ε, uma quinase de IκB não canônica que integra a detecção imune inata a programas transcricionais inflamatórios. A IKK-ε fosforila intermediários-chave de sinalização para promover a ativação de IRF3/IRF7 e a expressão gênica dependente de NF-κB, moldando respostas de interferon tipo I e a produção de citocinas. Por meio de interação cruzada com vias a jusante de TLRs, receptores do tipo RIG-I e STING, a IKK-ε influencia as defesas antivirais, a sobrevivência celular e a sinalização de estresse metabólico. A atividade desregulada de IKBKE tem sido associada a estados inflamatórios persistentes e foi estudada no contexto de redes de sinalização associadas a tumores e da remodelação do microambiente imune.

IKK-ε O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IKBKE sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IKK-ε O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IKBKE em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IKBKE, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IKK-ε. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IKBKE nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IKK-ε no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IKK-ε em células tumorais com expressão de IKBKE silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.