Plasmide Double Nickase (h) Ihh: sc-401466-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Ihh correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Ihh Double Nickase (h) et le plasmide Ihh Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant IHH. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Ihh Antibody (H-12): sc-271101
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Ihh | sc-401466-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Ihh | sc-401466-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène *Indian hedgehog* (IHH) code Ihh, un morphogène sécrété qui transmet son signal via PTCH1/SMO afin d’activer les facteurs de transcription GLI et de réguler les décisions de destinée cellulaire au cours du développement. Ihh joue un rôle central dans l’ossification endochondrale, la prolifération et l’hypertrophie des chondrocytes, ainsi que la coordination de l’engagement de la lignée ostéoblastique, en s’intégrant à des voies qui contrôlent la production de matrice extracellulaire et l’organisation de la plaque de croissance. En biologie humaine, une altération de la signalisation IHH est associée à des défauts de mise en place du squelette et à une dérégulation de l’activité de la voie Hedgehog, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude des gradients de morphogènes et de l’homéostasie tissulaire. En tant que composant de voie dont les effets dépendent du contexte, IHH est fréquemment utilisé pour explorer les programmes transcriptionnels pilotés par Hedgehog et les dynamiques de différenciation.
Ihh Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IHH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IHH. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IHH. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IHH.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.