Plásmido Doble Nickase (h) Ihh: sc-401466-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Ihh consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Ihh (h) y el plásmido de doble nickasa Ihh (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a IHH. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Ihh Anticuerpo (H-12): sc-271101
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Ihh | sc-401466-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Ihh | sc-401466-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Indian hedgehog (IHH) codifica Ihh, un morfógeno secretado que señaliza a través de PTCH1/SMO para activar los factores de transcripción GLI y regular decisiones de destino celular durante el desarrollo. Ihh desempeña funciones centrales en la osificación endocondral, la proliferación e hipertrofia de los condrocitos y la coordinación del compromiso de linaje de los osteoblastos, integrándose con vías que controlan la producción de matriz extracelular y la organización de la placa de crecimiento. En biología humana, la alteración de la señalización de IHH se asocia con defectos en el patrón esquelético y con una actividad desregulada de la vía Hedgehog, lo que la convierte en un nodo clave para estudiar gradientes de morfógenos y la homeostasis tisular. Como componente de una vía con efectos dependientes del contexto, IHH se utiliza con frecuencia para investigar programas transcripcionales impulsados por Hedgehog y la dinámica de diferenciación.
Ihh El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus IHH en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de IHH. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de IHH. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con IHH alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.