Plasmide CRISPR/Cas9 KO IGSF4B (h): sc-405765

Présentation

CADM3 (également connu sous le nom d’IGSF4B) code une molécule d’adhérence cellulaire appartenant à la superfamille des immunoglobulines, qui soutient des contacts cellule–cellule indépendants du calcium et contribue à l’organisation de microdomaines membranaires au niveau des jonctions intercellulaires. Par une signalisation dépendante de l’adhérence, CADM3 peut influencer la croissance des neurites, la connectivité synaptique et l’architecture des tissus épithéliaux et neuronaux, le reliant ainsi à des voies qui gouvernent la polarité cellulaire et le contrôle de la croissance médié par le contact. Une expression ou une régulation altérée de CADM3 a été rapportée dans des études sur les processus neurodéveloppementaux ainsi qu’en biologie du cancer, où des changements des programmes d’adhérence peuvent affecter l’invasion, la différenciation et le comportement métastatique. En tant que facteur d’adhérence associé à la surface cellulaire, IGSF4B est donc pertinent pour étudier comment les complexes jonctionnels et la signalisation de l’adhérence remodèlent la communication cellulaire et l’organisation tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IGSF4B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CADM3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CADM3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CADM3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IGSF4B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CADM3 pour l'étude de la signalisation de IGSF4B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CADM3 essentiels à la fonction de IGSF4B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CADM3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IGSF4B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le IGSF4B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CADM3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IGSF4B plasmide HDR (h) et le IGSF4B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CADM3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CADM3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.