IGFBP7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418272-ACT

IGFBP7 (proteína 7 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina) é uma proteína matricelular secretada que modula a sinalização de IGF/insulina ao ligar-se aos IGFs e interagir com componentes da matriz extracelular, influenciando a disponibilidade de ligantes e o engajamento dos receptores. Ela contribui para a regulação da adesão celular, da senescência e das respostas ao estresse, e tem sido associada à biologia de células endoteliais e de músculo liso, incluindo vias que governam o remodelamento vascular e a renovação da matriz extracelular. Alterações na expressão de IGFBP7 são frequentemente observadas em contextos de fibrose, inflamação e remodelamento do microambiente tumoral, nos quais pode afetar programas de proliferação, migração e angiogênese. Essas propriedades tornam a IGFBP7 um alvo útil para estudos mecanísticos de crosstalk na sinalização de fatores de crescimento e de fenótipos impulsionados pela MEC em sistemas celulares humanos.

IGFBP7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IGFBP7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IGFBP7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IGFBP7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IGFBP7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IGFBP7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IGFBP7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IGFBP7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IGFBP7 em células tumorais com expressão de IGFBP7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.