Plasmide CRISPR d'Activation (h) IGFBP7: sc-418272-ACT

IGFBP7 (insulin-like growth factor binding protein 7) est une protéine matricellulaire sécrétée qui module la signalisation IGF/insuline en se liant aux IGF et en interagissant avec des composants de la matrice extracellulaire afin d’influencer la disponibilité des ligands et l’engagement des récepteurs. Elle contribue à la régulation de l’adhésion cellulaire, de la sénescence et des réponses au stress, et a été associée à la biologie des cellules endothéliales et des cellules musculaires lisses, notamment via des voies contrôlant le remodelage vasculaire et le renouvellement de la matrice extracellulaire. Des variations d’expression d’IGFBP7 sont fréquemment observées dans des contextes de fibrose, d’inflammation et de remodelage du microenvironnement tumoral, où elle peut affecter la prolifération, la migration et les programmes angiogéniques. Ces propriétés font d’IGFBP7 une cible utile pour des études mécanistiques sur la diaphonie des voies de signalisation des facteurs de croissance et sur des phénotypes induits par la MEC dans des systèmes cellulaires humains.

IGFBP7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IGFBP7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IGFBP7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IGFBP7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IGFBP7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IGFBP7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IGFBP7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IGFBP7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IGFBP7 dans les cellules tumorales présentant une expression de IGFBP7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.