Plasmide CRISPR d'Activation (h) IGFBP6: sc-404768-ACT

IGFBP6 code la protéine de liaison au facteur de croissance analogue à l’insuline 6 (insulin-like growth factor binding protein 6), une glycoprotéine sécrétée qui se lie de façon préférentielle à l’IGF‑II et en module la biodisponibilité, l’engagement des récepteurs et la signalisation en aval via des voies telles que PI3K–AKT et MAPK/ERK. En régulant des signaux IGF‑dépendants de croissance, de survie et de différenciation, IGFBP6 contribue à l’homéostasie tissulaire et aux réponses au stress cellulaire dans de multiples contextes organiques. Des altérations de l’expression d’IGFBP6 ont été rapportées dans divers travaux en cancérologie et en recherche métabolique, où elles peuvent influencer des phénotypes de prolifération, de migration et d’apoptose associés à une dérégulation de la signalisation IGF. En tant que régulateur extracellulaire soluble, IGFBP6 est également étudiée pour son impact sur la communication paracrine au sein du microenvironnement tumoral ainsi que dans des modèles de biologie du développement et d’endocrinologie.

IGFBP6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IGFBP6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IGFBP6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IGFBP6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IGFBP6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IGFBP6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IGFBP6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IGFBP6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IGFBP6 dans les cellules tumorales présentant une expression de IGFBP6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.