Particules Lentivirales d'Activation (h) IGFBP5: sc-400945-LAC

IGFBP5 (insulin-like growth factor binding protein 5) est un régulateur sécrété et associé à la matrice extracellulaire de la signalisation des IGF, qui module la biodisponibilité ainsi que l’interaction avec les récepteurs d’IGF‑I et d’IGF‑II. En façonnant la sortie des voies PI3K–AKT et MAPK/ERK en aval d’IGF1R, IGFBP5 influence la prolifération, la survie, la migration et la différenciation cellulaires, avec en plus des effets indépendants des IGF sur l’adhérence cellulaire et le remodelage de la matrice. Dans les tissus humains, IGFBP5 est associé à la biologie des cellules mésenchymateuses et des fibroblastes, aux programmes ostéogéniques et aux états transcriptionnels liés à la réparation des plaies, en interaction fréquente avec la signalisation TGF‑β/SMAD et l’organisation de la MEC. Une expression dérégulée d’IGFBP5 a été rapportée dans divers microenvironnements fibrosants et associés aux tumeurs, ce qui en fait un nœud utile pour étudier, selon le contexte, la réponse aux facteurs de croissance et le remodelage stromal.

Les particules d'activation lentivirales IGFBP5 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de IGFBP5 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales IGFBP5 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription IGFBP5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de IGFBP5. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif IGFBP5 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.