Plasmide Double Nickase (m) IGFBP4: sc-421065-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) IGFBP4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide IGFBP4 Double Nickase (m) et le plasmide IGFBP4 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Igfbp4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (m) IGFBP4 | sc-421065-NIC | 20 µg | $410.00 |
Igfbp4 code la protéine 4 de liaison aux facteurs de croissance de type insulinique (IGFBP4), un régulateur sécrété de la biodisponibilité des IGF qui module les interactions d’IGF1/IGF2 avec leurs récepteurs et influence les voies de signalisation PI3K–AKT et MAPK en aval. En séquestrant les IGF et en façonnant des gradients locaux de facteurs de croissance, IGFBP4 contribue au contrôle de la prolifération, de la différenciation et de la survie cellulaires, ainsi que du remodelage tissulaire. En biologie murine, Igfbp4 est étudié dans des contextes tels que l’homéostasie vasculaire et cardiaque, le développement squelettique, et la régulation reproductive et métabolique, où la signalisation IGF est un déterminant majeur des phénotypes. Une activité dérégulée de l’axe IGFBP4/IGF a été associée à des processus pertinents pour la maladie, notamment la fibrose, l’angiogenèse et un contrôle anormal de la croissance, ce qui fait d’Igfbp4 un locus utile pour les études mécanistiques des voies de signalisation.
IGFBP4 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Igfbp4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Igfbp4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Igfbp4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Igfbp4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.