Plasmide Double Nickase (h) IGFBP4: sc-402342-NIC

La protéine 4 de liaison au facteur de croissance de type insuline (IGFBP4) est un modulateur sécrété de la biodisponibilité d’IGF‑I et d’IGF‑II qui régule l’engagement des récepteurs ainsi que la signalisation en aval PI3K–AKT et MAPK, façonnant les programmes de prolifération, de survie et de différenciation cellulaires. En se liant aux IGF dans le milieu extracellulaire, IGFBP4 peut ajuster les gradients de facteurs de croissance et les réponses paracrines/autocrines dans des contextes de remodelage tissulaire, notamment au sein des microenvironnements vasculaires et stromaux. Une expression ou un clivage altérés d’IGFBP4 ont été associés à une dérégulation des signaux de croissance observée dans la fibrose, les dysfonctions métaboliques, le remodelage cardiovasculaire et divers phénotypes liés au cancer. Par conséquent, IGFBP4 est fréquemment étudiée comme un régulateur dépendant du contexte de l’activité de l’axe IGF et de la dynamique de la signalisation extracellulaire.

IGFBP4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IGFBP4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IGFBP4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IGFBP4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IGFBP4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.