IGFBP4 Plasmide Double Nickase (h): sc-402342-NIC

La proteina 4 legante il fattore di crescita insulino-simile (IGFBP4) è un modulatore secreto della biodisponibilità di IGF-I e IGF-II che regola l’interazione con i recettori e la segnalazione a valle PI3K–AKT e MAPK, plasmando programmi cellulari di proliferazione, sopravvivenza e differenziamento. Legando gli IGF nel compartimento extracellulare, IGFBP4 può modulare i gradienti dei fattori di crescita e le risposte paracrine/autocrine nei contesti di rimodellamento tissutale, inclusi i microambienti vascolari e stromali. Alterazioni dell’espressione o della processazione di IGFBP4 sono state associate a una deregolazione della segnalazione di crescita osservata nella fibrosi, nella disfunzione metabolica, nel rimodellamento cardiovascolare e in diversi fenotipi correlati al cancro. Di conseguenza, IGFBP4 è spesso studiata come regolatore dipendente dal contesto dell’attività dell’asse IGF e delle dinamiche di segnalazione extracellulare.

IGFBP4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IGFBP4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IGFBP4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IGFBP4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IGFBP4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.