IGFBP4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402342-ACT

IGFBP4 codifica la proteina legante l’IGF 4 (insulin-like growth factor binding protein 4), un regolatore secreto che modula la biodisponibilità di IGF-I e IGF-II e la segnalazione a valle mediata da IGF1R. Legando gli IGF nello spazio extracellulare, IGFBP4 influenza l’attività delle vie PI3K–AKT e MAPK, plasmando proliferazione, sopravvivenza e differenziamento cellulari, nonché il rimodellamento tissutale. L’attività di IGFBP4 è inoltre collegata alla dinamica della matrice extracellulare e alla sua processazione proteolitica, integrando il controllo dei fattori di crescita con i segnali del microambiente. Un’alterata espressione di IGFBP4 è stata riportata in diversi contesti, tra cui la biologia cardiovascolare, l’omeostasi scheletrica, il rimodellamento associato alla fibrosi e la segnalazione di crescita correlata al cancro, a supporto del suo valore come bersaglio di ricerca meccanicistica.

IGFBP4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IGFBP4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IGFBP4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IGFBP4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IGFBP4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IGFBP4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IGFBP4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IGFBP4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IGFBP4 nelle cellule tumorali con espressione di IGFBP4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.