Plasmide CRISPR/Cas9 KO IGFBP3 (m): sc-421064

Présentation

Igfbp3 code la protéine 3 de liaison aux facteurs de croissance de type insuline (IGFBP3), un régulateur sécrété qui se lie à l’IGF‑I et à l’IGF‑II afin de moduler leur biodisponibilité, leur interaction avec les récepteurs et la signalisation en aval via l’axe IGF. En modulant l’activité des voies PI3K–AKT et MAPK/ERK induites par l’IGF, IGFBP3 influence la croissance, la survie et la différenciation cellulaires, ainsi que le remodelage tissulaire dans de nombreux organes chez la souris. IGFBP3 peut également exercer des effets dépendants de l’IGF et indépendants de l’IGF sur l’apoptose et les réponses au stress via des interactions avec des composants de la matrice extracellulaire et des partenaires de surface cellulaire. Une expression dérégulée d’Igfbp3 ou un déséquilibre IGF/IGFBP est fréquemment étudié dans des contextes de contrôle anormal de la croissance, de régulation métabolique, d’inflammation et de réseaux de signalisation oncogénique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IGFBP3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Igfbp3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Igfbp3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Igfbp3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IGFBP3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Igfbp3 pour l'étude de la signalisation de IGFBP3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Igfbp3 essentiels à la fonction de IGFBP3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Igfbp3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IGFBP3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le IGFBP3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Igfbp3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IGFBP3 plasmide HDR (m) et le IGFBP3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Igfbp3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Igfbp3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.