IGF2R/M6PR Double Nickaseプラスミド (h): sc-401697-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- IGF2R/M6PR Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- IGF2R/M6PRダブルニカースプラスミド（h）およびIGF2R/M6PRダブルニカースプラスミド（h2）は、IGF2Rを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: IGF2R/M6PR 抗体 (2G11): sc-53146
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
IGF2R/M6PR Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401697-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IGF2R/M6PR Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401697-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
IGF2R（IGF2R/M6PR とも呼ばれる）は、カチオン非依存性マンノース-6-リン酸受容体をコードします。これは多機能なトラフィッキングタンパク質で、M6P タグを付加されたリソソーム加水分解酵素に結合し、トランスゴルジ網およびエンドソームからリソソームへのソーティングを仲介します。また、細胞外 IGF2 のスカベンジャー受容体としても機能し、増殖因子の利用可能性を調節して、細胞増殖や分化に関連するシグナル伝達プログラムに影響を与えます。エンドソーム―リソソーム輸送における中心的役割を通じて、IGF2R はオートファジー―リソソーム機能、受容体のターンオーバー、プロテオスタシスに影響します。IGF2R の制御異常は、リソソーム恒常性の変化や増殖因子シグナルの不均衡と関連づけられており、発生表現型やがん生物学研究において重要とされています。
IGF2R/M6PR ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における IGF2R 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、IGF2R内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、IGF2Rの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、IGF2Rが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。